Estandarización de un radioinmunoanálisis (RIA) para hormona de crecimiento bovina (bGH) y validación en plasma de vacas Holstein / A radioimmunoassay (RIA) standardization for bovine growth hormone (bGH) and their validation in plasma of Holstein cows

La hormona de crecimiento (GH) purificada a partir de adenohipófisis bovinas (bGH) y su antisuero obtenido en conejos, se utilizaron para desarrollar un radioinmunoanálisis (RIA) homólogo y específico. El antisuero como segundo anticuerpo. La bGH se iodizó por el método de la Cloramina T con una actividad específica de 93 µCi/µg. Cantidades crecientes de plasma bovino desplazaron paralelamente a la curva patrón cuya linearidad estuvo entre 1.31 y 39.4 ng/ml. La recuperación de cantidades conocidas de bGH añadidas a plasma bovino fue de 98.5 por ciento. El coeficiente de variación intra e interensayo fue menor a 5.1 por ciento y 8.3 por ciento respectivamente. Otras hormonas adenohipofisarias no mostraron reacciones cruzadas. Con este procedimiento se determinaron concentraciones plasmáticas de GH a cuatro vacas Holstein a la 5 y 14 semanas posparto. En cada periodo se tomaron muestras de sangre cada treinta minutos durante 24 horas a través de un catéter colocado en la vena yugular. Las muestras individuales mostraron un coeficiente de variación durante el día entre 25 por ciento y 65 por ciento. Las concentraciones de GH en plasma fueron superiores (P < 0.001) a las catorce semanas (7.80 ng/ml) que a las cinco semanas posparto (6.00 ng/ml). En virtud de que estos animales se encontraban en condiciones de pastoreo con limitada ración rica en energía, es posible que todavía a las catorce semanas de lactancia se hayan movilizado reservas corporales para favorecer la producción de leche

Obtención, purificación y caracterización de dos formas de hormona luteinizante de la adenohipófisis caprina (gLH) / Obtention, purification and characterization of two forms of caprine luteinizing hormone from adenohypophsis (gLH)

Se describe la obtención, purificación y caracterización de dos proteínas hipofisiarias de origen caprino con carga eléctrica diferente y con características de hormona luteinizante (LH). La fracción no retenida en la cromatografía de intercambio catiónico (CM-celulosa) designada CM-lab y la correspondiente al segundo pico de dicha cromatografía (CM-2ab), se repurificaron en una cromatografía de intercambio aniónico (DEAE-celulosa) en condiciones idénticas, para obtener LH-I (CM-lab-DEAE-la) con un rendimiento de 76 mg/kg de adenohipófisis, y a la LH-II (CM2ab-DEAE-lb) con 15 mg/kg. La diferencia de carga de cada proteína se determinó por su movilidad relativa (Rf) mediante una electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE) en condiciones nativas. La LH-I mostró un Rf de 0.09 (banda mayoritaria) y 0.415, mientras la LH-II presentó 2 bandas de tipo catiónico con un Rf de 0.14, 0.19 (banda mayoritaria). La determinación del peso molecular relativo de LH-I y LH-II, se llevo a cabo por medio de una electroforesis en geles de poliacilamida-dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE). En condiciones no reductoras (NR), ambas proteínas presentaron un peso molecular relativo de 36.5 kilodaltones (KDa) correspondiente a la forma monomérica, semejante a los estándares NIDDK-oLH-26 y USDA-bLH5, mientras que en presencia de 2ß-mercaptoetanol (condiciones reducidas), las proteínas presentaron un peso molecular de 22.4 y 20.2 KDa. El análisis por inmunotransferencia (Western-blot) en condiciones NR utilizando el anti-oLH (CSU-204), permitió identificar bandas inmunorreactivas de peso molecular de 50,43, 36.5 (mayoritaria), y 22.4 KDa, tanto en los estándares como en las fracciones obtenidas en este estudio. La potencia biológica realizada en un bioensayo in vivo 3 + 3 balanceado fue de 1.03 UI/mg para la LH-I. y de 0.65 UI/mg para la LH-II con intervalos de confianza de 95 por ciento. Su actividad inmunológica se determinó con un radioinmunoensayo (RIA) homólogo de LH caprina, a la dosis esperada del 50 por ciento (ED 50). Los resultados fueron de 1.7 ng/ml y 3.5 ng/ml para LH-I y LH-II respectivamante. Se concluye que esta técnica permite la obtención de dos proteínas con carga eléctrica diferente, con actividad biológica e inmunológica de LH, y con peso molecular idéntico

Determinación de la hormona luteinizante con un radioinmunoanálisis (RIA) homólogo en cabras estimuladas con diferentes dosis de hormona liberadora de las gonadotropinas (GnRH) / Determination o luteinizing hormone with homologous raioimmunoassay (RIA) in goats stimulated with various doses of gonadotrophin liberating hormone (GnRH)

El presente estudio informa la validación clínica del RIA homológo de LH en cabras mestizas con estro inducido y estimuladas con dosis únicas de GNRH. Se trabajó con 24 cabras distribuidas al azar en cinco grupos. A los grupos del I al IV (n5) se les colocó esponjas con acetaro de fluorogestona (FGA) a dosis de 45 mg/animal, durante nueve días, no así al V (n4), pues se le mantuvo como testigo. Después de 24 horas de retiradas las esponjas los grupos I, II y III, se estimularon por vía intravenosa con 2, 4 y 8 µg de GnRH respectivamente, a los grupos IV y V se les administró solución salina. El muestreo se realizó cada 15 minutos, durante un periodo de cinco horas (2 h antes del estímulo con GnRH o solución salina y 3 h después). Los niveles circulantes de LH se determinaron con un sistema de RIA homólogo en fase líquida con segundo anticuerpo como sistema de separación. El grupo I presentó un pico de LH de 21.4 ñ 7.4 ng/mL; el grupo II de 13.4 ñ 3.16 ng/mL, ambos con una P<0.05 con respecto al grupo V, el cual mostró un valor promedio de LH de 4.72 ñ 0.28 ng/mL; el grupo III presentó un pico de 11.4 ñ 8.60 ng/mL sin que resultara significativo; en el grupo IV no se detectaron niveles de LH. Ni un solo animal mostró niveles de progesterona durante 21 días posteriores al estímulo con GnRH, con base en lo anterior se sugiere que los picos de LH detectados durante el experimento no fueron preovularotios